Объявления сайта

Экспрессия цитокератина 7 эпителиоцитами шейки матки у женщин с миомами матки

 
Picture of Gülnabat Toşşiýewa
Экспрессия цитокератина 7 эпителиоцитами шейки матки у женщин с миомами матки
by Gülnabat Toşşiýewa - Monday, 27 June 2022, 1:03 PM
 

           Иммуногистохимическим методом выявлялся уровень экспрессии ЦК7 в железистом и многослойном плоском эпителии шейки матки у женщин с миомами матки. Поражение шейки матки (экзо- и эндоцервикса) у женщин с миомами матки носило более тяжелый характер по сравнению с женщинами контрольной группы. У женщин с миомами экспрессия ЦК7 эпителиоцитами шейки матки, в обычных условиях выявляемая в клетках желез и их протоков, проявлялась в железах с признаками аденоакантоза, гиперплазии и псевдоплоскоклеточной метаплазии и дисплазии, а также в эпителиоцитах многослойного плоского эпителия, особенно в участках с признаками дисплазии. Все это должно учитываться при обследовании женщин с миомами матки, особенно при выявлении у них фоновых и предраковых заболеваний шейки матки. Особую важность это приобретает в случаях, когда у таких женщин обнаруживаются также признаки инфекции вирусом папилломы человека. Таким образом, обследование должно носить комплексный характер и в обязательном порядке предусматривать патогистологическое исследование, дополненное иммуногистохимическим.

           Ключевые слова: цитокератин 7, иммуногистохимия, миома матки, шейка матки, фоновые процессы, предраковые процессы

 

         Цитокератин 7 (ЦК7) относится к нейтрально-основной группе промежуточных филаментов (ПФ) или тканеспецифических белков, имеющих молекулярную массу 52,5-68 кДа, куда входят еще цитокератины № 1-6 и 8. В норме он экспрессируется клетками переходного эпителия мочевыводящих путей, призматического (секреторного) эпителия желез и их протоков, а также клетками мезотелия [1]. Поэтому во многих случаях он используется для определения происхождения опухолей и их метастазов, развившихся из вышеперечисленных видов эпителия. Сюда относятся иммуногистохимические исследования на тканях опухолей мочевого пузыря [15], желудка [22], легкого [21] и в том числе метастазов [13]. ЦК7 используется также для проведения дифференциальной диагностики, например, между плоскоклеточным и железистым раком легкого [27]. Особо интересными в этом плане являются исследования органов и тканей, в которых изначально (в норме) имеются и железистый и плоский эпителий. Так, авторы отмечают экспрессию этого протеина в клетках железистого и плоского эпителия пищевода [18] и анального региона [23]. Обнаружена экспрессия этого протеина и при раке желудка с плоскоклеточным компонентом [22] или в случае плоскоклеточной трансформации эпителия щитовидной железы при раке этого органа [12]. Другие исследователи наблюдали подобную экспрессию и в железистом эпителии эндоцервикса, и в плоском эпителии экзоцервикса, а также в регенераторном псевдоплоскоклеточном эпителии шейки матки [16,17].  

         Ранее считалось, что плоскоклеточный рак встречается в шейке матки в подавляющем количестве случаев [2]. В последнее время, однако, отмечается рост железистого рака (аденокарциномы) шейки матки [4,25]. Цитокератиновый фенотип аденокарциномы включает, в том числе и ЦК7, который характерен для резервных и призматических клеток слизистой оболочки эндоцервикса. Сходство кератинового набора резервных клеток и клеточных элементов аденокарциномы эндоцервикса может служить по мнению Smetds еt аl. [24], веским доказательством резервноклеточного происхождения железистых раков шейки матки. В пользу такого предположения говорят также многочисленные факты выявления раковых опухолей с двойной (железисто-плоскоклеточной) дифференцировкой [5]. Кроме того, не исключается возникновение рака на фоне не только собственно предраковых (дисплазия, особенно тяжелой степени), но и фоновых состояний и заболеваний шейки матки, среди которых можно особо выделить аденоакантоз и гиперплазию железистых клеток [8,14]. Многие авторы отмечают при этом, что он часто возникает в железах у места стыка (переходной зоны) многослойного плоского и железистого эпителия шейки матки [10,16].

         Несмотря на все накопившиеся данные, в научной литературе нет указаний на исследования иммуногистохимического характера по определению характера повреждения эпителиальной ткани, в том числе и опухолевой природы, в шейке матки у пациенток с миомами матки. В то же время в одном из исследований клинического характера подчеркивается актуальность проблемы изучения состояния шейки матки у больных лейомиомой, определяемая тем, что как миома матки, так и заболевания шейки матки являются наиболее часто встречаемыми гинекологическими заболеваниями женских половых органов [9].

         Цель работы. Выявить уровень экспрессии ЦК7 в железистом и многослойном плоском эпителии шейки матки у женщин с миомами матки и определить возможные изменения фенотипа эпителиоцитов, в первую очередь многослойного плоского эпителия у этих пациенток, которые в последующем могли бы способствовать развитию здесь более тяжелых видов патологии, в том числе опухолей.

         Материал и методы исследования. Ретроспективно был проанализирован валовый биопсийный и аутопсийный материал, присланный в Центральное патологоанатомическое учреждение на гистологическое исследование из разных клиник города Ашгабата в 2011-2015 годах. I группу (основную) составил материал пациенток с патологией шейки матки с миомами матки (n=56). Их средний возраст составил 33,4±5,6 лет. Для сравнения были исследованы ткани шейки матки у женщин без миом (II группа, n=62) со средним возрастом 32,6±6,4 лет. Кусочки ткани шейки матки из места перехода (стыка) одного эпителия в другой размером 1,0х1,0см фиксировались в 10% буферном растворе формалина (с нейтральной реакцией рН) и заливались в парафин. Из парафиновых блоков готовились срезы толщиной 4 мкм, которые красились гематоксилином и эозином по стандартному протоколу. Далее выставлялся патогистологический диагноз согласно критериям Кондрикова (2008) [3]. Затем на параллельно приготовленных из парафиновых блоков срезах толщиной также 4 мкм было проведено иммуногистохимическое исследования с антителом против ЦК7. Исследование было проведено согласно рекомендациям производителя (Dako, Дания) на аппарате AutostainerLink 48. Использовалось антитело против цитокератина 7 (ЦК7 или CK7, клон: OV-TL 12/30, готовое к употреблению или ready-to-use). Результаты иммуногистохимического исследования, учитывавшего положительное цитоплазматическое окрашивание клеток в виде Score-показателя, были подсчитаны с помощью полуколичественного метода по Remmele и Stegner (1988) [20]. Score-показатель является при этом значением, полученным при умножении среднеарифметической цифры интенсивности окраски клеток (от 0 до 3) на индекс (среднеарифметическую цифру, от 0 до 4) количества окрашенных клеток на основе изучения 20 произвольных полей зрения для каждого случая. Полученные данные были статистически обработаны с помощью t-теста стандартного пакета программ Windows 2010.

         Результат исследования. При стандартном патоморфологическом исследовании женщинам I и II групп был выставлен патогистологический диагноз. У женщин I группы по сравнению со II было обнаружено статистически достоверное преобладание по частоте хронических экзо- и эндоцервицитов, цервикозов (особенно пролиферирующих), аденоакантозу и резервноклеточной гиперплазии желез, дисплазии многослойного плоского эпителия. По другим показателям (полипам канала шейки матки, гипер- и паракератоз, а также акантоз плоского эпителия и других) достоверных отличий обнаружено не было. При иммуногистохимическом исследовании были обнаружены следующие результаты (табл.).

Таблица. Сравнительные результаты иммуногистохимического исследования положительно окрашенных клеток (цитоплазматическое окрашивание) в виде Score-показателя

Признак

Основная группа, n=56

(M±m)

Контрольная группа, n=62 (M±m)

p-показатель

1.

Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы без признаков аденоакантоза)

11,15±1,62

11,38±2,02

n.s.

2.

Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы с признаками аденоакантоза)

10,68±1,28

7,42±0,65

P<0,05

3.

Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы с признаками псевдоплоскоклеточной метаплазии)

7,25±0,87

5,03±0,45

P<0,05

4.

Score-показатель клеток железистого эпителия эндоцервикса (железы с признаками дисплазии)

10,71±1,53

5,21±0,61

P<0,01

5.

Score-показатель клеток многослойного плоского эпителия экзоцервикса

6,18±0,81

1,06±0,07

P<0,001

6.

Score-показатель клеток многослойного плоского эпителия экзоцервикса с признаками дисплазии

9,84±1,7

1,34±0,09

P<0,001

7.

Score-показатель стромальных клеток

0,0±0,0

0,0±0,0

n.s.

 

         Статистически достоверная разница в экспрессии ЦК7 была выявлена со стороны клеток железистого эпителия эндоцервикса, находящихся у места перехода многослойного эпителия в железистый в железах с признаками гиперплазии (рис.1), псевдоплоскоклеточной метаплазии (рис.2,3), аденоакантоза (рис.4) и дисплазии (рис.5).

 

Рис.1. Женщина 51 года из I группы. Железа с признаками гиперплазии (бóльшая часть). И обычные аденоциты и таковые в зоне гиперплазии коричнево (положительно) окрашены на ЦК7. Увеличение х390.

 

Рис.2. Женщина 41 года из I группы. В центре железа с псевдоплоскоклеточной метаплазией, клетки которой коричнево (положительно) окрашены на ЦК7. В других железах ожидаемая положительная окраска на ЦК7 со стороны обычных аденоцитов. Увеличение х80.

Рис.3. Женщина 39 лет из II группы. В железах ожидаемая положительная окраска (клетки коричнево окрашены) на ЦК7 со стороны обычных аденоцитов. Увеличение х80.

Рис.4. Женщина 53 лет из I группы. В центре крупная железа с признаками аденоакантоза (псевдоплоские клетки, «сидящие» на базальной мембране, поджимают железистые клетки и отодвигают их к центру железы, то есть к просвету; там же образуются балки). И обычные аденоциты и таковые в зоне гиперплазии коричнево (положительно) окрашены на ЦК7. Увеличение х280.

 


Рис.5. Женщина 43 лет из I группы. В центре крупная железа с признаками дисплазии средне-тяжелой степени. Обычные аденоциты этой и соседней желез менее интенсивно окрашены на ЦК7, в то время как окраска железистых клеток в состоянии дисплазии (вверху и частично справа) резко положительна. Увеличение х390.

 

         Разница в экспрессии ЦК7 со стороны клеток многослойного эпителия также была достоверной (рис.6,7). При этом она была более выраженной, чем в эпителиоцитах эндоцервикса. Тем не менее, особое внимание привлекает к себе тот факт, что еще бóльшая достоверная разница в экспрессии была обнаружена в многослойном плоском эпителии с признаками дисплазии (рис.8). Разницы в экспрессии ЦК7 со стороны клеток стромы как эндоцервикса, так и экзоцервикса обнаружено не было.

 

Рис.6. Женщина 45 лет из I группы. Зона трансформации. Слева – железистый эпителий, справа – многослойный плоский (МПЭ). В МПЭ многие клетки коричнево окрашенные – положительные клетки на ЦК7. В строме выраженное хроническое воспаление. Увеличение х80.

Рис.7. Женщина 48 лет из II группы. Зона трансформации. Справа - железистый эпителий, слева – многослойный плоский (МПЭ). В МПЭ – положительные окрашенных клеток на ЦК7 не обнаружено. В строме выраженное хроническое воспаление. Увеличение х80.

 

Рис.8. Женщина 49 лет из I группы. Вверху мнослойный плоский эпителий в состоянии тяжелой дисплазии (карцинома in situ). Отдельные клетки его (слева и единичные справа) практически не окрашены, в то время как большай часть клеток интенсивно положительно окрашены на ЦК7. Внизу рисунка видна железа с почти закрытым просветом и положительно окрашенными на ЦК7 аденоцитами. Увеличение х390.

 

         Обсуждение и выводы. Поражение шейки матки (экзо- и эндоцервикса) у женщин с миомами матки носило более тяжелый характер по сравнению с женщинами контрольной группы. Особо настораживает тот факт, что у женщин с миомами экспрессия ЦК7 эпителиоцитами шейки матки, в обычных условиях выявляемая в клетках желез и их протоков, проявляется в железах с признаками аденоакантоза, гиперплазии и псевдоплоскоклеточной метаплазии и дисплазии, а также в эпителиоцитах многослойного плоского эпителия, особенно в участках с признаками дисплазии. Эпителий шейки матки является одним из наиболее частых мест формирования раковых опухолей у женщин. Внешние факторы (вирус папилломы человека) наряду с генетическими (наследственными) факторами могут играть определенную роль в возникновении рака этой локализации [6]. Известно, что в результате даже банального воспалительного процесса (экзо- и эндоцервицит) может нарушиться процесс замещения цилиндрического эпителия на многослойный плоский при, например, эктопии шейки матки и это может способствовать развитию различных патологических ее состояний [3]. В развитие плоскоклеточного рака могут быть вовлечены повреждения в механизмах контроля процессов гиперплазии эпителия и (псевдо)плоскоклеточной метаплазии [8]. Наши наблюдения могут свидетельствовать об изменении фенотипа клеток МПЭ и приобретении ими отдельных свойств железистых или резервных клеток, дающих положительную реакцию на ЦК7, более выраженных у женщин с миомами. В этом плане наши результаты коррелируют с мнением других авторов, высказывавших предположение, что несмотря на свою специфичность к цилиндрическому эпителию, ЦК7 может экспрессироваться и клетками плоского эпителия в случаях, когда вследствие каких-либо причин происходит изменение фенотипа этих клеток [19,26]. Это можно объяснить тем фактом, что камбиальные клетки эпителия, за счет которых происходит регенерация эпителиоцитов при различного рода повреждениях, являются бипотентными [3]. Они могут дифференцироваться как в клетки многослойного плоского эпителия, образуя очаги псевдоплоскоклеточной метаплазии, так и клетки железистого эпителия с бόльшим риском развития в последствии аденоакантоза и прочих изменениях патологического характера, наблюдаемых преимущественно у женщин с миомами. Кроме того, по самым современным данным, не исключается роль в патогенезе патологии шейки матки самого ЦК7 [17].

         Все это должно учитываться при обследовании женщин с миомами матки, особенно при выявлении у них фоновых и предраковых заболеваний шейки матки. Особую важность это приобретает в случаях, когда у таких женщин обнаруживаются также признаки инфекции вирусом папилломы человека. Таким образом, обследование должно носить комплексный характер и в обязательном порядке предусматривать патогистологическое исследование, дополненное иммуногистохимическим. Последнее, за счет своей высокой специфичности благодаря сродству применяемого антитела к антигену в тканях, позволит с большей достоверностью ставить патогистологический диагноз. Ведь основными направлениями в проблеме рака шейки матки является его профилактика за счет ранней диагностики фоновых и предраковых заболеваний, так как злокачественные поражения шейки матки редко возникают на неизмененном эпителии.

Ulanylan edebiýatlar

 

1.Бабиченко И.И., Ковязин В.А. Новые методы иммуногистохимической диагностики опухолевого роста: Учеб. пособие. // М.: РУДН. - 2008. – 109 с.

2.Бебнева Т.Н. Клинико-морфологические особенности шейки матки при папилломавирусной инфекции. // Автореф. дисс. канд. мед. наук. – Москва, 2001.

3.Кондрикoв Н.И. Патология матки.// М., Практическая медицина. – 2008. – 334 с.

4.Новик В.И. Эпидемиология и профилактика рака шейки матки. // Медлайн-экспресс. 2008. - № 5.-С. 36-41.

5.Петров С.В., Райхлин. Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. // Казань, «Титул». - 2004. - С.117-124.

6.Роговская С.И. Папилломавирусная инфекция нижних отделов гениталий: клиника, диагностика, лечение. // Автореф. дисс. доктора мед. наук. – Москва, 2003.

7.Русакевич П.С., Гришанович Р.В.. Системный функциональный подход к диагностике и лечению вирусных изменений цервикса. // Сибирский онкологический журнал. - 2011. - №3(45). - С.22-28.

8.Сидорова И.С., Леваков С.А. Фоновые и предраковые процессы шейки матки. // М.: Медицинское информационное агентство, 2006. — 96 с.

9.Шиляев А.Ю. Клиника, диагностика и лечение патологии шейки матки у больных с миомой матки. // Автореф. дисс. канд. мед. наук. – Москва, 2009.

10.Anand .M, Deshmukh S.D., Gulati H.K. Papillary squamotransitional cell carcinoma of the uterine cervix: A histomorphological and immunohistochemical study of nine cases. //  Indian J Med Paediatr Oncol. – 2013. - Apr-Jun;34(2). - P.66–71.

11.Azevedo R.S.,  de Almeida O.P., Kowalski L.P., Pires F.R. Comparative Cytokeratin Expression in the Different Cell Types of Salivary Gland Mucoepidermoid Carcinoma/ // Head Neck Pathol. – 2008. - Dec;2(4). - P.257–264.

12.Eom T.I., Koo B.Y., Kim B.S., Kang K.H., Jung S.K., Jun S.Y., Bae H.S., Kim L.S.

Coexistence of primary squamous cell carcinoma of thyroid with classic papillary thyroidcarcinoma. // Pathol Int. – 2008. - Dec;58(12). - P.797-800.

13.Gruver A.M., Amin M.B., Luthringer D.J., Westfall D., Arora K., Farver C.F., Osunkoya A.O., McKenney J.K., Hansel D.E. Selective immunohistochemical markers to distinguish between metastatic high-grade urothelialcarcinoma and primary poorly differentiated invasive squamous cell carcinoma of the lung. // Arch Pathol Lab Med. – 2012. - Nov;136(11). - P.1339-1346.

14.Kerdraon O., Cornélius A., Farine M.O., Boulanger L., Wacrenier A. Adenoid basal hyperplasia of the uterine cervix: a lesion of reserve cell type, distinct from adenoid basal carcinoma. // Hum Pathol. – 2012. - Dec;43(12). - P.2255-2265.

15.Kim M., Ro J.Y., Amin M.B., de Peralta-Venturina M., Kwon G.Y., Park Y.W., Cho Y.M. Urothelial eddies in papillary urothelial neoplasms: a distinct morphologic pattern with low risk for progression. // Int J Clin Exp Pathol. – 2013. - 6(8). - P.1458–1466.

16.Koenig C., Turnicky R.P., Kankam C.F., Tavassoli F.A. Papillary squamotransitional cell carcinoma of the cervix: a report of 32 cases. // Am J Surg Pathol. – 1997. - Aug;21(8). -  P.915-921.

17.Lee Ho., Lee Hye., Cho Y.K. Cytokeratin7 and cytokeratin19 expression in high grade cervical intraepithelial neoplasm and squamous cell carcinoma and their possible association in cervical carcinogenesis. // Diagn Pathol. – 2017. - Vol.12. - P.18-24.

18.Oue N., Noguchi T., Anami K., Kitano S., Sakamoto N., Sentani K., Uraoka N., Aoyagi K., Yoshida T., Sasaki H., Yasui W. Cytokeratin 7 is a Predictive Marker for Survival in Patients with Esophageal Squamous Cell Carcinoma. // Annals of Surgical Oncology. – 2012. – Vol.19, Issue 6. - P.1902–1910

19.Pulitzer M., Desman G., Busam K.J. CK7 expression in primary cutaneous squamous cell carcinoma. // J Cutan Pathol. – 2010. - Sep;37(9). - P.966-972.

20.Remmele W., Stegner H.E. Recommendation for uniform definition of an immunoreactive score (IRS) for immunohistochemical estrogen receptor detection (ER-ICA) in breast cancer tissue. // Pathologe. - 1987. - №8. – Р.138-140.

21.Roy S., Nandi A., Das I., Mandal P.K. Comparative study of cytology and immunocytochemistry with trucut biopsy and immunohistochemistry in diagnosis of localized lung lesions: A prospective study. // J Cytol. – 2015. - Apr-Jun;32(2). - P.90–95.

22.Saito S., Hosoya Y., Morishima K., Ui T., Haruta H., Kurashina K., Meguro Y., Zuiki T., Sata N., Fujii H., Matsubara D., Niki T., Lefor A.T., Yasuda Y. A clinicopathological and immunohistochemical study of gastric cancer with squamous cell carcinoma components: a clinically aggressive tumor. // J Dig Dis. – 2012. - Aug;13(8). – P.407-413.

23.Sakamoto T., Konishi F., Yoshida T., Yoshinaga Y., Izumo T., Lefore A. Adenocarcinoma arising from an anal gland — Report of a case. // Int J Surg Case Rep. – 2014. – Vol.5(5). – P.234–236.

24.Smedts F., Ramaekers F., Trojanovsky S.M. et al. Keratin expression in cervical cancer. // Amer J Pathol. – 1992. – Vol.141. – P.497-511.

25.Wang S.S., Sherman M.E., Hildesheim A. Cervical adenocarcinoma and squamous cell carcinoma incidence trends among white woman and black woman in the United States for 1976-2000. // Cancer. - 2004. - Vol.100. - P.1035-1044.

26.Yamada A., Sasaki H., Aoyagi K., Sano M., Fujii S., Daiko H., Nishimura M., Yoshida T., Chiba T., Ochiai A. Expression of cytokeratin 7 predicts survival in stage I/IIA/IIB squamous cell carcinoma of the esophagus. // Oncol Rep. – 2008. - Nov;20(5). - P.1021-1027.

27.Xu X.Y., Yang G.Y., Yang J.H., Li J. Analysis of clinical characteristics and differential diagnosis of the lung biopsy specimens in 99 adenocarcinoma cases and 111 squamous cell carcinoma cases: utility of an immunohistochemical panel containing CK5/6, CK34βE12, p63, CK7 and TTF-1. // Pathol Res Pract. – 2014. - Oct;210(10). – P.680-685.